Лабораторні тести для діагностики COVID-19, які зараз використовуються на практиці, згідно з рекомендаціями міжнародних експертів, переглядаються та оцінюються.
COVID-19 хвороба, яка виникла в Ухані в Китаї, до цього часу вплинула на понад 208 країн. За останні кілька місяців перед науковим співтовариством усього світу поставлено серйозне завдання для розвитку діагностичні тести та цінності COVID-19 виявлення захворювань з метою скринінгу пацієнтів та підозрюваних осіб з метою ефективного контролю та контролю пандемії.
Перш ніж оцінити поточні методи та методи, які використовуються для виявлення COVID-19, давайте спочатку зрозуміти, що викликає COVID-19 і як розробляти діагностичні тести для скринінгу пацієнтів на це захворювання. Захворювання COVID-19 викликається позитивно ланцюжковою РНК вірус які є зоонозами, що означає, що вони можуть долати види бар’єрів від тварин до людей і можуть викликати у людей захворювання, починаючи від звичайної застуди і закінчуючи більш важкими захворюваннями, такими як MERS та SARS. Вірус, що викликає COVID-19, тепер отримав назву SARS-CoV-2 Міжнародним комітетом таксономії вірусів (ICTV), оскільки він дуже схожий на той, що спричинив спалах SARS (SARS-CoVs). Діагностичний тест на захворювання COVID-19 можна розробити кількома способами.
Найпопулярнішим і прийнятним методом у всьому світі є розробка діагностичного тесту, який може виявити сам вірус SARS-CoV-2. Це тест ґрунтується на виявленні вірусного геному у зразку пацієнта за допомогою ПЛР у реальному часі RT (полімеразна ланцюгова реакція зворотної транскриптази в реальному часі). Це тягне за собою перетворення вірусної РНК в ДНК за допомогою ферменту, званого зворотною транскриптазою, а потім ампліфікацію ДНК за допомогою спеціального набору праймерів і флуоресцентного зонда, які зв’язуються з певною ділянкою вірусної ДНК, за допомогою полімерази Taq і виявлення флуоресцентного сигналу. Ці тести називаються NAAT (тести на ампліфікацію нуклеїнових кислот). Ця методика може бути дуже корисною для дуже раннього виявлення присутності нуклеїнової кислоти в зразку пацієнта, навіть у безсимптомних пацієнтів, які не мають симптомів захворювання COVID-19 (особливо в інкубаційний період 14-28 днів) і в більш пізній частині а також, коли хвороба повноцінна.
Протягом останніх кількох місяців різні компанії в усьому світі працювали в гонці з часом, щоб розробити діагностичний тест на основі NAAT для виявлення SARS-CoV-2 на основі рекомендацій CDC (Центр контролю захворювань), Атланти, США та ВООЗ ( 1, 2). Органи охорони здоров’я в усьому світі схвалили ці тести для екстреного використання для виявлення SARS-CoV-2. Вірусні гени, на які зараз спрямовані, включають гени N, E, S і RdRP, а також відповідні позитивні та негативні контролі. Зразки пацієнта, які збираються для такого тесту, беруть з верхніх дихальних шляхів (мазок з носоглотки та ротоглотки) та/або нижніх дихальних шляхів (мокротиння та/або ендотрахеальний аспірат або бронхоальвеолярний лаваж). Однак можна також виявити вірус в інших зразках, включаючи кал і кров. Необхідно швидко відбирати зразки відповідним чином, дотримуючись усіх необхідних запобіжних заходів та дотримуючись методів біобезпеки (відповідно до рекомендацій ВООЗ[1]), у пацієнтів, які відповідають визначенню підозрюваного захворювання на COVID-19, зберігаючи та пакуючи їх. добре, якщо його потрібно транспортувати до діагностичного центру, а потім швидко обробляти (виділення РНК у шафі біобезпеки в BSL-2 або еквівалентному об’єкті) таким чином, щоб забезпечити цілісність зразка. Все це має виконуватися на пріоритетній основі для кращого клінічного ведення та контролю за спалахом.
Час виявлення для різних доступних тестів на основі NAAT, розроблених великими діагностичними компаніями по всьому світу, варіюється від 45 хвилин до 3.5 годин. У ці тести вносяться різноманітні вдосконалення, щоб перетворити їх у тести на місці догляду та отримати бажані результати за якомога менший час без шкоди для точності результату, щоб збільшити кількість тестів, які можна зробити за день.
Інші варіанти діагностичних тестів є швидкі діагностичні тести (RDT) які або виявляють вірусні антигени/білки, які експресуються на поверхні частинок вірусу SARS-CoV-2, коли вони реплікуються в клітинах-хазяїнах і викликають захворювання, або антитіла господаря у відповідь на інфекцію; цей тест виявляє наявність антитіл у крові людей, які, як вважають, були інфіковані COVID-19 (3).
Точність і відтворюваність RDT для виявлення вірусних антигенів залежить від кількох факторів, включаючи час від початку захворювання, концентрацію вірусу в зразку, якість та обробку зразка, а також рецептуру реагентів, присутніх у тест-наборах. Через ці змінні чутливість цих тестів може варіюватися від 34% до 80%. Основним недоліком цього варіанту є те, що вірус повинен бути на стадії реплікації та інфікування, щоб виявити вірусні білки.
Аналогічно, тести на виявлення антитіл господаря базуються на силі реакції антитіл, яка залежить від таких факторів, як вік, стан харчування, тяжкість захворювання та певні ліки чи інфекції, які пригнічують імунну систему. Основним недоліком цього варіанту є те, що антитіла виробляються протягом кількох днів або тижнів після зараження вірусом SARS-CoV-2, і потрібно чекати стільки часу, щоб провести тест. Це означає, що діагностика інфекції COVID-19 на основі відповіді антитіл хазяїна часто буде можлива лише на етапі відновлення, коли багато можливостей для клінічного втручання або запобігання передачі хвороби вже пройшли.
Наразі згадані вище RDT були схвалені лише в умовах дослідження, а не для клінічної діагностики через відсутність даних (3, 4). Оскільки все більше і більше епідеміологічних даних стане доступним для COVID-19, більше RDT буде розроблено та затверджено як тести для надання допомоги в клінічних умовах, оскільки вони можуть дати результати за 10-30 хвилин, на відміну від тестів на основі NAAT, які в середньому займають кілька годин для виявлення захворювання.
***
Список використаної літератури:
1. ВООЗ, 2020 р. Рекомендації щодо стратегії лабораторного тестування на COVID-19. Тимчасове керівництво. 21 березня 2020 р. Доступно онлайн за адресою https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Доступ 09 квітня 2020 року
2. CDC 2020. Інформація для лабораторій. Тимчасове керівництво для лабораторій, доступне в Інтернеті за адресою https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Доступ 09 квітня 2020 року.
3. ВООЗ, 2020. Поради щодо використання тестів на місці надання допомоги. Науковий запис. 08 квітня 2020 р. Доступно онлайн за адресою https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Доступ 09 квітня 2020 року.
4. ECDC, 2020. Огляд ситуації з швидким тестуванням для діагностики COVID-19 в ЄС/ЄЕЗ. 01 квітня 2020 р. Європейський центр профілактики та контролю захворювань. Доступний онлайн за адресою https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Доступ 09 квітня 2020 року
***
